引言
80%的HCC（乙肝病毒相关的肝细胞癌）是由慢性乙肝病毒（HBV）感染引起，而由HBV基因组编码的乙型肝炎X蛋白（HBx）则是引发癌症的主要原因。作为一种多方面的反式激活蛋白，HBx可以刺激各种原癌基因的表达，包括c-Fos、c-Myc和c-Jun，从而参与促进肝细胞增殖、抑制DNA损伤反应和细胞凋亡的重要致癌过程，并诱导蛋白质降解和HBV复制 ，并且HBx对于启动和维持HBVcccDNA的转录至关重要。
HBx的降解依赖泛素-蛋白酶体系统（UPS），但最近福建医科大学陈婉南团队的研究发现，UPS中DUB（去泛素化酶）也可以对HBx进行调节。相关文章发表在Journal of Virology上，揭示了一种新的HBx调控机制，通过VCPIP1（含有valosin的蛋白质相互作用蛋白1）。
VCPIP1是新型HBx结合蛋白
研究人员通过对74-DUB库进行酵母双杂交试验，发现MPN结构域蛋白（MPND）、泛素羧基末端水解酶22（USP22）、COP9信号体复合物亚基6（COPS6）和VCPIP1 可能与HBx相互作用，针对VCPIP1与HBx进行免疫共沉淀对照试验和反向Co-IP试验，发现VCPIP1与HBx沉淀明显高于对照组。这表明VCPIP1可能是新型的HBx结合蛋白。
VCPIP1通过延长HBx半衰期增加HBx的表达
研究发现，无论有或者无HBV，VCPIP1都会增加HBx的表达。并且VCPIP1过表达导致Huh7和HepG2细胞中HBx以剂量依赖性方式显著增加。
而使用靶向VCPIP1的小干扰RNA（siRNA）（siVCPIP1#1和#2）处理，可以使HBx表达水平显著降低。
并且在使用含有1.2倍野生型HBV全基因组长度的pRep-HBV质粒感染Huh7和HepG2细胞后，VCPIP1依然能使HBx的表达增加。
而这种表达增加主要是通过延长HBx半衰期的形式实现。使用放线菌酮（CHX）来阻断蛋白质合成，发现，无论是在全长VCPIP1蛋白或aa863至1221相互作用域上，VCPIP1的过表达都将HBx蛋白的半衰期从30分钟延长到了60分钟。
全长VCPIP1-Flag
C-末端VCPIP1-Flag（aa863至1221）
相反，抑制VCPIP1导致HBx的半衰期从30分钟减少到20分钟。
VCPIP1通过招募PSMC3，抑制HBx降解，并且是非泛素依赖的
细胞内蛋白质的降解主要由26S蛋白酶体介导，该蛋白酶体由两个19S调节复合物和一个20S蛋白水解核心蛋白酶体组成，此前的作者的研究发现20S蛋白酶体亚基PSMA7介导HBx降解。
考虑到VCPIP1上调HBx的表达 ，作者假设VCPIP1也有类似的机理。对26S蛋白酶的几个亚基（PSMA1、PSMA3、PSMA7、PSMC1和PSMC3 ）进行测试，发现在VCPIP1过表达的情况下，仅有PSMC3与HBx结合富集。体外测试PSMC3与HBx结合也抑制了HBx的降解，细胞内测试发现在VCPIP1过表达时异位，PSMC3表达诱导的HBx持续增加。这表明VCPIP1通过招募SMC3与HBx结合形成三元复合物，而抑制20S蛋白酶体对HBx的降解。
并且这种结合是非泛素依赖的。在体内进行泛素化测定，通过使用标记抗体缀合的琼脂糖珠来沉淀HBx，检测HBx蛋白的泛素化，发现VCPIP1过表达导致Huh7和HepG2细胞中的HBx显著增加，但并没有减少HBx泛素化的量。
而通过泛素化能力受损的pHBxKOR-Flag（HBxKOR（泛素化位点）突变HBx，半衰期与野生型一样为30分钟）质粒试验，发现VCPIP1过表达仍然促进了缺乏泛素化的HBx突变体的表达。
小结
吴琼等人的研究揭示了一种新的HBx降解机制，VCPIP1募集PSMC3可以上调HBx水平。VCPIP1-HBx相互作用促进HBx典型的反式激活活性和细胞增殖抑制。此外，VCPIP1募集PSMC3，提高HBx蛋白水平，并增强HBV cccDNA转录。这表明，靶向VCPIP1或者PSMC3的药物或方法可能能够增加HBx降解，产生更好的拮抗HBV cccDNA的功效，给HCC新药的研发开辟了新的方向。
参考来源：
[1] Hepatitis B Virus X Protein Is Stabilized by the Deubiquitinating Enzyme VCPIP1 in a Ubiquitin-Independent Manner by Recruiting the 26S Proteasome Subunit PSMC3
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