工具 | PARP和DDR通路药物研发解决方案

DNA损伤应答（DNA damage response 简称 DDR）是一种正常的细胞功能，可激活细胞DNA修复、导致细胞周期停滞、诱导细胞衰老和/或凋亡以应答细胞DNA损伤。DDR通路缺陷可导致基因组不稳定性，诱发癌症，致使细胞增殖失控。DDR途径中的许多激酶，如WEE1、DNA PK和ATM/ATR，已被用作癌症治疗的药物靶点。聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）家族由17个成员组成，参与介导一系列细胞过程，包括基因转录和DNA修复，与人类疾病发生密切相关。

许多信号网络都与DDR机制有关。这些模式涉及传感器（例如PARP）、介质（例如DNA PK、ATM、ATR）以及信号传导的传导子和效应器（例如激酶）。

NanoBRET™ TE PARP Assay可用于表征PARP抑制剂对多种PARP的选择性和亲和力。细胞内滞留时间可以用一种简单的形式进行评估，即在添加示踪剂之前，添加未修饰的化合物。洗去化合物后，添加示踪剂，并对活细胞中的滞留时间进行测定。

PARP1抑制剂对于未经深入研究的PARP作用复杂

经FDA批准的临床PARP抑制剂在细胞中可结合一系列单PARP

DNA损伤时， PARP活性被上调。单体NAD(+)被消耗，并在损伤处经酶促聚合反应形成聚ADP核糖基化链，或将单ADP核糖添加至目标底物中。

【利用ADP-Glo™ Assay分析激酶选择性】

ADP-Glo™ Kinase Assay是一种适用于所有激酶研究的通用体外生化测定法，也是Promega的金牌药物筛选方法之一。该检测可测定激酶反应中生成的ADP。ADP可转化为ATP，可用于生成稳定的发光信号。

ADP-Glo™ Assay的适用范围包括：

• 高通量筛选

• 反应模式研究

• 激酶抑制剂分析

【筛选和分析激酶抑制剂】

经过优化的Kinase Enzyme System可与ADP-Glo™ Assay共同使用，便于筛选和分析激酶抑制剂。

与DNA损伤应答相关的激酶如下：

·  DNA-PK

·  CDK6/Cyclin D3

·  CHK1 

·  PLK-家族

·  CHK2

·  CK2α亚型

·  CDK2/Cyclin A1

·  MAPKAPK2(MK2)

·  CDK2/Cyclin E1

·  MARK3

【活细胞靶点结合】

NanoBRET™ Target Engagement (TE) Kinase Assays可用于定量检测活细胞内化合物与全长激酶的结合。

该检测可对340多种激酶，包括许多参与DDR的激酶（例如，CHK1、CHK2、CDK2/Cycin A1、CDK2/Cyclin E1、CDK6/Cycin D、PKMYT1、PLK家族、CK2α亚型、MAPKAPK2（MK2）、MARK3、Wee1）。

每个激酶都有单独的使用说明，查看Kinase Target Engagement Assay Selection Guide，了解可用激酶的完整列表。

与无细胞分析法相比，活细胞内的DDR激酶抑制剂选择性

【总的或磷酸化的细胞靶标测定】

使用Lumit™ Immunoassay Cellular Systems研究DNA损伤应答中的信号节点。

该方法是一种无需洗涤的生物发光免疫分析，可直接测量细胞裂解物中的目标分析物。该分析可以定制，以检测参与DNA损伤反应的信号节点，使用简单的工作流程，不需要培养液移除或裂解物转移。只需将标记抗体添加至样本中，添加检测试剂，读取发光信号——所有步骤都在同一块检测板中完成。

【测定细胞活性和细胞毒性】

Promega提供了多种检测组合用于测定细胞活性。这些可自动化的、实时的或终点的分析方法都可使用简单的“加样-混合-读取”模式，是二次筛选和先导物优化的理想选择。可测定候选药物对活细胞（包括3D培养中的细胞）的细胞健康和细胞毒性的影响。

CellTiter-Glo^®Cell Viability Assay是基于生物发光法，高灵敏度的检测，具有广泛的线性度，也是细胞活力检测的“金标准”。可用于384孔板和1536孔板，进行高通量初次筛选使用。

我们的定制检测服务可协助您推进小分子和大分子药物发现和开发流程。基于我们的技术，我们可提供综合性服务，用于获得高灵敏度、高通量的生物相关结果。更多相关信息，请联系定制研发解决方案团队。

【PARP化合物选择性分析服务】

·  使用NanoBRET™TE检测对12个PARP家族成员进行活细胞选择性分析

·  BRET比率数据具有再现性，错误率较低

【激酶细胞选择性化合物分析服务】

·  使用NanoBRET™TE检测对240个激酶进行活细胞选择性分析

·  BRET比率数据具有再现性，错误率较低

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