使用均质高通量筛选平台监测外核苷酸酶 CD39 和 CD73 的活性及抗体和小分子对其的特异性调节
最近人们认识到肿瘤微环境中腺苷水平显著增加，以及腺苷/腺苷受体在免疫抑制方面发挥着重要作用，并减弱了多种效应T细胞的功能，这激发了人们对靶向产生腺苷的外核苷酸酶的兴趣。在微环境中产生腺苷的主要酶是外核苷酸酶 CD39 和 CD73，前者利用 ATP 和 ADP 生成 AMP，而后者则利用 AMP 生成腺苷。因此，这两种酶结合在一起是微环境中大部分腺苷产生的主要来源。这些酶已被证实为肿瘤学的有效靶标，导致了多项临床试验，包括小分子和抗体，这些试验在临床前阶段显示出积极且鼓舞人心的结果。
AMP-Glo™ Assay可用于监测这两种酶在体外（生化）和细胞内（基于细胞的）检测中的活性。该平台非常灵敏，且检测法为均相，使我们能够监测纯化酶和细胞膜上结合的酶的活性。最重要的是，它能够区分已知小分子抑制剂以及特异性单克隆抗体的选择性。我们近期对许多小分子和几种抗体的测试扩展确认了这种方法对于发现可能与其他治疗方案（如化疗）协同作用的新疗法的有效性。这将加速新抑制剂的筛选，从而实现更有效的癌症治疗。
01
AMP-Glo™ Assay 基本原理及优势
酶促反应完成后，添加 AMP-Glo™ Reagent I 终止反应，除去剩余的 ATP，并将 AMP 转化为 ADP。添加 AMP Detection Solution 促使 ADP 转化为ATP，并通过萤光素酶反应检测 ATP。反应的 AMP 生成量与光信号测量值成正比，并可使用标准曲线定量计算。
AMP-Glo™ 技术优势
• 更加通用，适合检测低活性酶
• 适合高达1536孔板高通量酶或抑制剂筛选
• 卓越的灵敏度和线性范围
• 生物发光酶偶联检测法，不受荧光干扰
• 无需特殊仪器，仅需发光检测仪
02
监测体外水平纯化的 CD73 酶活性
纯化CD73活性的时程研究
APCP抑制剂对纯化CD73的滴定
(0.1ng/Rxn , 5min Rxn )
使用不同细胞系监测体外纯化CD73酶活性
不同细胞系中ecto CD73的时程研究
(25K/well, 10 μM AMP)
不同细胞系中 CD73 的 Western Blot
(10µg/sample)
MDA-MB-231细胞系使用不同的针对CD73抗体处理后进行检测
03
不同细胞系监测体内外CD39酶活性
使用不同细胞系测定胞外CD39 的时程研究
(200K/mL , 5μM ATP )
不同细胞系中 CD39 的 Western Blot
(20µg/sample)
在体内或体外进行 CD39化合物筛选 (Farage)
纯化的CD39（体外）
Farage细胞（体内）
确定CD39和CD73抑制剂对其他酶的特异性
04
产品信息及资料下载
点击上图下载
AMP 相关酶药物靶标高通量检测技术手册
产品名称 | 规格 | 目录号 |
1,000 Assays | V5011 | |
10,000 Assays | V5012 |
ABOUT PROMEGA
关于Promega公司
Promega Corporation是一家为生命科学行业提供高质量解决方案和技术支持的全球领先生物技术企业。在其44年的历史中，Promega已建立了包含有4000多种支持细胞和分子生物学的目录产品和定制产品的组合。如今，Promega开发的萤光素酶(即荧光素酶)等技术推动了活细胞分析、药物发现、分子诊断和人体识别等领域的创新，并且由实验室科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医学、制药、临床诊断以及农业和环境检测。Promega总部位于美国威斯康星州麦迪逊市，在16个国家设有分公司，拥有50多家全球经销商。如需获取更多信息，请访问www.promega.com。
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