参一胶囊联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的抑制作用

细胞：采用浙江省肿瘤医院建立的高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM。

参一胶囊(Rg3)：由吉林亚泰制药有限公司供，纯度为99.9%的Rg3制剂；

顺铂(DDP)针剂，每支10mg:2mL；

CCK-8。

流式细胞仪FACSCalibur，二氧化碳(CO₂)培养箱HERAEUSB5060EU，万能倒置显微镜JMT-2，CliniBio128酶联免疫测定仪，H-600型电子显微镜。

（1）细胞培养及实验分组

细胞随机分成6组：

①阴性对照组(A组)：只加新鲜的全培养液；

②低浓度组(B组)：含10μg·mL-1Rg3培养液；

③中浓度组:(C组)：含20μg·mL-1Rg3培养液；

④高浓度组(D组)：含40μg·mL-1Rg3培养液；

⑤顺铂阳性对照组(E组)：含10μg·mL-1顺铂的培养液；

⑥顺铂+Rg3联合用药组(F组)：含10μg·mL-1顺铂+20μg·mL-1Rg3培养液。

每次实验均在相同条件下重复4次。

（2）Rg3对细胞毒作用

活细胞计数：取对数生长期的细胞制成1× 105·mL-1的细胞悬液。取3mL细胞悬液于25mL的培养瓶中；培养24h后，弃去培养液，按组别换入不同浓度的Rg3培养液。药物作用24h后，消化收集各组细胞，以台盼蓝排除法进行活细胞计数，重复4次求得平均值，以观察Rg3对卵巢癌细胞的生长抑制作用。

（3）Rg3对细胞形态的影响

细胞培养48h后分别用光学显微镜和电子显微镜观察各组细胞的形态变化。光镜标本用95%乙醇溶液固定盖片，苏木精-伊红(HE)染色后在OLYMPUS显微镜下观察并拍照。电镜标本经消化打落贴壁细胞，用磷酸盐(PBS)液洗，2.5%戊二醛固定，1%锇酸固定，丙酮梯度脱水，环氧树脂浸透，包埋，超薄切片，以铀、铅双重染色法染色，电子显微镜下观察形态改变。

如图1所示，随着g3浓度的增高，活细胞数下降，以Rg3加DDP联合作用后的细胞数下降明显，B、C、D、E、F组和A组之间比较均差异有极显著性(均P<0.01)，结果提示Rg3和DDP对卵巢癌活细胞均有不同程度的抑制作用。

从表1可见细胞自然杀伤率可随Rg3药物浓度的增高和药物作用时间的延长而增加，对细胞生长的抑制现象随之明显。单因素分析结果显示：CCK-8法观察药物作用24h后6组细胞的抑制率差异无显著性(P>0.05)。多因素分析结果显示：CCK-8法观察药物作用24h后D、E、F组分别与A组比较均差异有显著性(P<0.05)。

6组细胞中Rg3和DDP联合后相比其余5组破坏最严重，提示虽然Rg3和DDP联合组对卵巢癌细胞的杀伤作用与高浓度Rg3组或DDP组无明显差异，但是在微观结构上二者联用后显示有相加或协同作用，对细胞形态结构上达到了最大的破坏损伤。目前正在进行流式细胞仪测定细胞内DNA含量、细胞周期及细胞凋亡等一系列的实验，以进一步研究Rg3的抑癌机制和探讨与DDP的协同作用，以便为临床用药提供一些参考依据。