人参皂苷Rg3通过Ca2+/CaM信号系统抑制胃癌BGC-823细胞增殖及其可能的机制

胃癌BGC-823细胞的培养及实验分组：

BGC-823细胞保持原培养液置细胞培养箱1d后，更换为新鲜5ml含10%胎牛血清的L-15培养基，置5%CO₂、37℃孵育箱中培养，待细胞增长至80%～90%汇合时，用0.25%胰蛋白酶消化1～2min，用吸管反复吹打贴壁细胞，使之脱离瓶壁充分分散。将细胞悬液按1:2稀释，传到新培养瓶中，每瓶加入5ml新鲜培养液继续培养。取对数生长期细胞制成5×10⁴/ml单细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μl，分别加入相应药剂作用细胞48h。按加药的不同分为对照组(不加药处理)、Rg3(50μg/ml)组、Ad-CaM组和Rg3(50μg/ml)+Ad-CaM组(加入Ad-CaM的目的是观察Ad-CaM是否能影响Rg3对CaM表达的影响)，每组设4个平行孔。

检测指标：

MTT法检测细胞增殖的影响、流式细胞术检测细胞凋亡的影响、Transwell实验检测细胞侵袭的影响、Western blotting检测细胞内CaM、IκB、CaMKⅡ和NF-κB表达的影响。

统计学处理：

采用SPSS13.0统计软件，所有数据以x平均±s表示，采用ANOVA方法进行检验，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞内CaM表达的影响

Western blotting检测结果(图1)显示，各组胃癌BGC-823细胞中均存在CaM的表达，但与对照组比较，Rg3组CaM的表达明显被抑制(13.24±0.28 vs 22.53±0.54，P=0.027)，而Ad-CaM组(29.63±0.61，P=0.036)和Rg3+Ad-CaM组(27.82±0.58，P=0.041)CaM的表达均明显增强。

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Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用

MTT检测结果显示，Rg3组细胞增殖抑制率高于对照组，差异具有统计学意义［(81.96±4.12)% vs (35.32±2.04)%，P=0.014］；而Ad-CaM组［(14.64±1.05)%，P=0.032］和Rg3+Ad-CaM组［(16.17±1.31)%，P=0.036］细胞增殖抑制率均显著低于对照组。

Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

流式细胞术检测结果(图2)显示，Rg3组细胞的凋亡率显著高于对照组［(58.96±3.56)% vs (28.80±1.41)%，P=0.029］；Ad-CaM组［(15.94±1.68)%，P=0.037］和Rg3+Ad-CaM组［(16.00±1.01)%，P=0.039］细胞凋亡率显著低于对照组。

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Rg3和/或Ad-CaM对胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响

Transwell实验检测结果(图3)显示，Rg3组BGC-823细胞穿膜细胞数显著低于对照组［(31±2) vs (86±5)个，P=0.029］；Ad-CaM组［(164±9)个，P=0.023］和Rg3+Ad-CaM组［(156±8)个，P=0.026］穿膜细胞数显著高于空白对照组。

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Rg3和/或Ad-CaM对BGC-823细胞NF-κB、CaMKⅡ和IκB的影响

Western blotting检测结果(图4)显示，与空白对照组比较，Rg3组细胞内NF-κB和CaMK Ⅱ的表达均被明显抑制(P=0.012，P=0.015)，IκB的表达被明显增强(P=0.031)；Ad-CaM组和Rg3+AdCaM组细胞内NF-κB(P=0.020，P=0.029)和CaMK Ⅱ(P=0.023，P=0.031)的表达均被明显增强，而IκB的表达均被明显抑制(P=0.031，P=0.033)。

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本研究结果显示，Rg3能够抑制BGC-823细胞内NF-κB和CaMK Ⅱ的表达、促进IκB的表达；Ad-CaM和Rg3+Ad-CaM的作用则相反。推测Rg3可能是通过抑制CaM的表达来降低NF-κB信号通路的活性，进而抑制胃癌细胞的生长。综上，Rg3可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖，其可能是通过降低Ca2+/CaM信号通路的表达，进而抑制NF-κB信号通路的活性来实现的。

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