人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞株侵袭和转移的实验研究

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本文是由解放军第八一医院全军肿瘤中心的华海清、秦叔逵等开展的基础研究，探讨人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用及其相关机制。研究表明：人参皂苷Rg3具有抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用,机制可能与其能够抑制肝癌细胞侵袭活力、调节与肝癌细胞侵袭与转移密切相关的基因表达和抗肿瘤血管形成有关。

细胞株与药品：

人类肝癌细胞株SMMC-7221细胞和建株人脐静脉内皮细胞株(ECV304)，均引自中国科学院上海细胞生物研究所。人参皂苷Rg3纯品，由吉林亚泰制药有限公司惠赠。使用前以二甲基亚砜(DMSO)溶解，用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度；而DMSO对照组含相应浓度的DMSO而不含Rg3。

方法:

选择人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞和建株人脐静脉内皮细胞株ECV304作为研究对象，通过细胞抑制实验(MTT法)、细胞粘附试验和免疫组化方法系统地观察人参皂苷Rg3体外对SMMC-7721细胞及ECV304细胞生长的抑制作用、SMMC-7721细胞与纤维粘连蛋白(FN)粘附以及表达nm23、CD44、VEGF基因蛋白的影响。

统计处理：

应用SPSS 10.0统计软件进行相关资料处理，采用方差分析和q检验。

结果：

1.人参皂苷Rg3对SMMC-7721及ECV304细胞生长的影响(MTT法)

各浓度组的人参皂苷Rg3对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞及ECV304细胞的抑制作用，强于相应浓度的人参皂苷Rg3溶解液MDSO，经统计处理，差异有显著性(前者P<0.01，后者P<0.05)，这种抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相关，特别是对SMMC-7721细胞的抑制作用，剂量越大、药物作用时间越长，抑制率越高(P<0.01或P<0.05)。见表 1、表 2。

2.人参皂苷Rg3对SMMC-7721细胞与FN粘附的影响

人参皂苷Rg3有明显的抑制SMMC-7721细胞与FN粘附的作用，各浓度组的抑制率与相应浓度的DMSO相比，均有显著差异(P≤0.01)；人参皂苷Rg3相同浓度作用不同时间或作用相同时间浓度不同的抑制率亦有显著差异(P≤0.01),即Rg3剂量增加，作用时间长，其抑制率就越高。见表 3。

3.人参皂苷Rg3对SMMC-7721细胞CD44、nm23和VEGF表达的影响

细胞免疫化学研究结果：SMMC-7721细胞未加药时，细胞粘附分子CD44呈强阳性表达(+++)，抑癌基因nm23呈阴性表达(-)，血管内皮生长因子VEGF呈强阳性表达(+++)，经125μg/ml的人参皂苷Rg3作用48小时后，CD44表达减弱(+)，nm23则表达增强(+++)，VEGF表达亦减弱(+)。

结论：

人参皂苷Rg3能够显著地抑制肝癌细胞株SMMC-7721细胞及内皮细胞株ECV304的生长，抑制SMMC-7721细胞与FN粘附及CD44、VEGF的表达，而增强nm23基因的表达。人参皂苷Rg3作为我国第一个中药单体抗癌新药,文献和细胞实验均证实有一定的抗肿瘤转移作用，同时我们在动物实验上亦发现有抗肿瘤侵袭转移作用；在临床上我们试用于肝癌、肺癌、胃癌等抗转移治疗显示出较好效果，值得今后作进一步深入研究。