人参皂苷Rg3联合三氧化二砷对人肝癌细胞增殖性的影响

将冻存于液氮罐中肝癌细胞株Be-l7402取出，复苏，体外培养于RPMI 1640中，加入10%小牛血清，青霉素10万U/L，链霉素100mg/L，单层培养于CO2恒温孵育箱内，细胞为上皮样贴壁生长，每2~3天传代1次，取对数生长期细胞用于实验，用10%小牛血清的RPMI 1640培养液稀释细胞至含瘤1×10⁷/ml，在裸鼠左前上肢腋窝皮下接种0.2ml。

32只雄性裸鼠造模后，随机分成联合用药组(以人参皂苷Rg3剂量不同分为3个亚组，每组4只)、Rg3组(分为5mg/kg、10mg/Pkg、20mg/kg亚组，每组4只)、三氧化二砷组(4只)和对照组(4只)。实验自肿瘤接种第3天开始，人参皂苷Rg3组(3个剂量)，分别隔日灌胃，共20次；三氧化二砷组给予As₂O₃ 40ug/kg/d每日腹腔内注射，连续28d；联合用药组的3个亚组分别给予3个不同剂量的人参皂苷Rg3灌胃和As₂O₃腹腔内注射；对照组为生理盐水。

停药1周后，脱颈处死，完整取出瘤块，比较各组瘤重。然后按以下公式计算肿瘤抑制率：肿瘤抑制率=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。采用免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)在裸鼠肝癌移植瘤组织中的表达情况。

应用SPSS11.0软件进行统计学处理，两个独立样本均数比较采用t检验；多个样本之间的两两比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

所有裸鼠种植人肝癌细胞株均成瘤并生长，但生长速度不同。本实验中发现联合用药组有1个癌灶较其他组明显缩小。Rg3组抑瘤率随着药物浓度的升高，呈现逐渐升高的趋势。Rg3组、三氧化二砷组、联合用药组，平均瘤重明显较对照组轻，差异有统计学意义(P<0.01)。三氧化二砷组抑瘤率高于Rg3组，但随着Rg3浓度的升高，二者之间的差异明显减小；联合用药组平均瘤重最低，抑瘤率最高，其抑瘤作用高于三氧化二砷组，差异有统计学意义(P<0.05)。

见表1。

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各组免疫组织化学实验结果表明，Rg3 3个干预组PI与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，随着药物浓度的升高，差异更加明显。三氧化二砷组优于Rg3组(P<0.05)，随着Rg3药物浓度的升高，差异逐渐减小。联合组PI值最低，且与三氧化二砷组差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

本研究显示，人参皂苷Rg3与三氧化二砷联合用药，可以明显抑制移植瘤肝癌细胞增殖性，二者的协同作用可能表现在通过抑制PCNA蛋白的表达，从而降低DNA多聚酶D的活性，干扰肿瘤细胞DNA的合成，阻断细胞进入S期而停止增殖，同时提高单药的抗肝癌转移的能力。本实验结果可能提示，Rg3可提高传统化疗的疗效，Rg3与化疗药联合应用将有可能成为控制肿瘤生长和转移的治疗方法。