T cell engager（TCE）双特异性抗体研发策略

T细胞重定向双抗（T cell engager，TCE）是可以将T细胞与肿瘤细胞连接的治疗性抗体。大多数TCE有三个结构域：一个结构域与T细胞受体的组分结合，一个结构域与肿瘤相关抗原结合，第三个结构域提供额外的功能，如延长半衰期。与常规的IgG相比，TCE被认为比Fc介导的ADCC更有效。与抗体药物偶联物(antibody drug conjugates，ADC) 相比，TCE的细胞毒性依赖于宿主的免疫系统，而不是化学有效载荷的细胞毒性，它攻击休眠状态和积极分裂的癌细胞，安全性更好。

TCE双抗在实体瘤开发中的挑战以及解决方式

TCE在血液瘤治疗中的优势高于实体瘤，主要是以下两种原因：

非肿瘤靶向毒性（On-Target Off-Tumor）：实体瘤中的靶点除了在肿瘤上表达外，大多还在正常组织中表达。在治疗过程中，抗体会将 T 细胞导向正常组织中，从而使得这些组织被 T 细胞攻击并造成不可逆的损伤。血液瘤的靶点在B 细胞或者骨髓细胞上表达，由于 B 细胞或者骨髓细胞被杀伤后可以通过造血干细胞进行再补充，从而不会很大程度地影响机体的功能。
肿瘤微环境中（TME）的效应细胞的数量：对于血液瘤，肿瘤细胞位于血液中并且被 T 细胞所环绕，因此 CD3 双特异抗体能够源源不断的招募 T 细胞对肿瘤进行杀伤。但是在实体瘤中，T 细胞发挥功能首先需要渗透进入肿瘤内部。

针对以上挑战，可通过寻找合适的靶点，调整抗体靶向肿瘤的「价」数-以增加对肿瘤的选择性，合理控制靶向CD3抗体亲和力-以控制靶向杀伤和细胞因子释放的平衡， Fc 沉默等策略最大程度消除TCE对于实体瘤治疗上的负面影响，最终获得最合适的靶向杀伤效果。

图1. TCE 双特异性抗体

蓬勃生物TCE 双抗开发平台

CD3抗体：SP34改造

目前有很多抗CD3抗体如UCHT‑1、OKT3等与猴源CD3或鼠源CD3无交叉反应，而抗CD3抗体SP34具有人猴CD3的交叉结合活性。同时，人源化SP34变体的亲和力范围很广，从11nM到521nM，解离常数(kd)值在1E-2到1E-3之间，基本可以满足激活型抗体的亲和力要求。目前，SP34被Amgen, Macrogenics, Xencor, Glenmark, Roche等各大公司所改造，Glofitamab, Epcoritamab, Teclistamab等多款双抗中抗CD3序列来源于SP34改造，因此，通过SP34改造，开发具有人猴交叉的CD3抗体在双抗开发中具有较大的实际应用价值。

蓬勃生物内部开发的一系列人源化SP34变体，具有不同亲和力，稳定性高，维持激活功能等特点，满足TCE双特异性抗体的开发需求。蓬勃生物可直接提供人源化SP34序列及对应ELISA检测，SPR检测，FACS检测，报告基因检测，成药性分析等相关数据，加速TCE双特异性抗体的研发进程。

图2. 部分SP34改造的CD3抗体亲和力及T细胞激活结果

ROR1ⅹCD3 TCE 双抗

作为一种 TAA，ROR1 在许多 B 细胞恶性肿瘤和实体瘤中过表达，但在正常组织中的表达有限。因此，ROR1xCD3 TCE BsAb 可以激活 T 细胞介导的细胞毒性并将其重定向到表达 ROR1 的癌细胞，从而抑制肿瘤生长并为各种癌症患者带来临床益处。

我们选择了将改造的SP34(AED-2018)与自研的ROR1 单域抗体进行了“1+1+1”TCE 的设计，与BMK EMB07（EpimAb）和NVG-111（NovalGen）相比，优选分子显示出以下特点：

1）与肿瘤细胞的结合能力在一定程度上与ROR1的表达量相关;

2）对肿瘤细胞具有有效的TDCC活性，体外细胞因子释放较低;

3）在ROR1高表达（ROR1^high）肿瘤细胞中可以诱导更有效的T细胞活化，反之ROR1低表达（ROR1^low）细胞中较弱

图3. ROR1ⅹCD3 TCE双抗能够选择性地杀伤高表达的肿瘤细胞，但不能杀伤低表达的正常细胞

Binding to cell surface huROR1 & huCD3

Enhanced affinity driven by Ag density (SPR)

More potent T cell activation in ROR1^high tumor cells but not ROR1^low cells

Potent TDCC activity with lower cytokine release

Potent TGI in CDX model

蓬勃生物双抗开发平台

除了TCE双特异性抗体外，金斯瑞蓬勃生物在多种常见双特异性抗体结构的研究与开发方面具有丰富的经验，可根据客户的靶点、作用机制、以及候选单抗的分子属性提供专业的双抗定制化研发建议。

金斯瑞蓬勃生物拥有超过20年生物药开发经验，是您最优的双抗发现合作伙伴：

截止日期：2024年6月

关于蓬勃生物

金斯瑞子公司蓬勃生物(GenScript ProBio)拥有一站式生物药研发生产平台，主要致力于为细胞和基因治疗(CGT)药物、疫苗及抗体蛋白药物等提供从靶点开发到商业化生产的端到端CDMO服务。蓬勃生物在美国、荷兰、韩国、上海、香港、南京等地设有公司以服务全球客户。自2017年10月，共助力美国、欧洲、亚太等区域客户获得超过90个IND批件。

蓬勃生物的细胞和基因治疗整体解决方案涵盖了非注册临床、工艺开发，注册临床和商业化全阶段质粒病毒生产。蓬勃生物的生物药开发解决方案涵盖生物药尤其是抗体药发现、抗体工程和抗体评价。在生物药CDMO服务方面，蓬勃生物为客户提供包括细胞系开发、宿主细胞商业化授权、上下游工艺开发、分析方法开发和临床样品及商业化生产等在内的一体化CDMO服务，并提供分批补料和灌流工艺以满足增长的抗体蛋白药的需求。GMP生产车间满足FDA、EMA和NMPA监管要求。

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