Lumit®免疫检测法用于监测PROTAC和分子胶相互作用及三元复合物形成
蛋白酶体靶向嵌合体（PROTACs）是一种异双功能小分子，该分子被设计用于降解特定的目标蛋白。由于PROTACs提供了一种新的药物开发作用机制，因此其在治疗上具有巨大的潜力。为了继续促进PROTACs领域的快速发展，需要高通量筛选技术来发现针对不同蛋白质和E3连接酶的新PROTACs。
Lumit® Anti-Tag Protein Interaction Reagents使研究人员能够在均质（无需洗涤）检测模式下，检测二元复合物相互作用及由PROTAC介导的三元复合物形成。
01
检测原理及优势
Lumit® Anti-Tag Protein Interaction Reagents 包括一系列针对常见蛋白标签（例如，His-、Flag® -、GST-tag 和人 Fc）的 LgBiT 标记抗体以及 SmBiT 标记的链霉亲和素，仅需“添加-读取”操作简单，适合多重检测和高通量筛选，可体外检测蛋白质-蛋白质和蛋白质-小分子相互作用。其特点如下：
• 真正基于溶液的检测方法；
• 简化工作流程，无需固定或洗涤步骤，可以在 120 分钟 内完成检测；
• 生物发光法更加灵敏。
具体技术信息请查看往期帖子：新品发布 | 简单、快速、高灵敏度的蛋白质互作检测系统
02
监测三元复合物形成
以BRD3(BD2)作为目标蛋白，我们使用Lumit® Anti-Tag Protein Interaction Reagents中的Lumit® Anti-DYKDDDDK-LgBiT（识别常用于标记蛋白质的 FLAG® 标签）和anti-GST-SmBiT监测了PROTAC介导的三元复合物（cereblon复合物和VHL复合物）形成。
上图. Lumit® Anti-Tag Protein Interaction Reagents可以确定不同PROTAC的相对效力。图A. 与cereblon复合物+BRD3(BD2)和dBET1或dBET6形成的三元复合物。图B. 与VHL复合物+BRD3(BD2)和ARV-771或MZ1形成的三元复合物。这些实验表明dBET6比dBET1更有效力，并且显示出ARV-771和MZ1之间效力相似。在这两个系统中，在高浓度PROTAC下观察到特征性的钩状效应。
03
检测分子胶与cereblon复合物的相互作用
上图.检测分子胶与cereblon复合物的相互作用。为了确定分子胶的相对亲和力，我们将它们滴定到cereblon-沙利度胺tracer复合物中。随着tracer的竞争移除，发光信号减少。相对IC50值与在裂解细胞中进行的靶标占据检测结果相关。
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检测PROTAC小分子和BET蛋白的相互作用
上图.为了确定连接子和cereblon结合配体如何影响PROTAC与BET家族成员的相互作用，我们观察了HJB97及其衍生物PROTAC（PROTAC BET Deg. 1和2）以及JQ1及其衍生物PROTACs（dBET1和dBET6）的相对IC50值。我们发现linker和E3结合配体增强了结合力。这些研究与来自裂解细胞的靶点结合实验结果相关联（未显示），表明这两种检测方法都可以用来筛选linker对目标亲和力的影响。
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Promega Corporation是一家为生命科学行业提供高质量解决方案和技术支持的全球领先生物技术企业。在其44年的历史中，Promega已建立了包含有4000多种支持细胞和分子生物学的目录产品和定制产品的组合。如今，Promega开发的萤光素酶(即荧光素酶)等技术推动了活细胞分析、药物发现、分子诊断和人体识别等领域的创新，并且由实验室科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医学、制药、临床诊断以及农业和环境检测。Promega总部位于美国威斯康星州麦迪逊市，在16个国家设有分公司，拥有50多家全球经销商。如需获取更多信息，请访问www.promega.com。
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