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通过2024诺贝尔奖,聚焦miRNA研究的思路和工具

microRNA miRNA


2024

Nobel

miRNA

研究思路

研究工具



2024诺贝尔生理学或医学奖


2024年10月7日,诺贝尔生理学或医学奖揭晓,美国科学家Victor Ambros和Gary Ruvkun因其在microRNA(微小RNA)及其在转录后基因调控中的开创性研究而获此殊荣。消息一经公布,关于这两位获奖者的信息迅速占据了各大社交媒体平台和新闻网站的头条,全球的目光再次聚焦于RNA相关研究领域。

自1993年Lee、Feinbaum与Ambros在线虫Caenorhabditis elegans中首次发现第一个microRNA (miRNA)——lin-4以来,对这种小分子RNA的研究经历了快速的发展,并逐渐扩展到多个实际应用领域。如今,已知microRNA是一类内源性的非编码RNA,它们的主要功能是通过多种机制下调基因表达,包括抑制翻译、促进mRNA降解等过程。这些作用使得microRNA在多种生物学过程中扮演着至关重要的角色,并为从基础科学研究到临床治疗、农业改良乃至环境监测等多个领域的应用奠定了坚实的基础。

随着技术的进步以及对miRNA理解的不断深化,基于miRNA的新颖应用正在持续涌现。与此同时,对于miRNA功能的研究也在不断推进。接下来,我们将为您梳理一些开展miRNA功能研究的基本思路、常用工具及重要参考文献。您准备好踏上自己的miRNA探索之旅了吗?


miRNA研究的一种基本思路

01

寻找研究对象,靶点筛选

寻找具有我们感兴趣的性质的miRNA或蛋白作为研究对象(如:在某样本中表达量异常升高或降低)。

02

确认研究对象

确认研究对象确实具有我们关心的性质(如:确认其表达量确实在目的样本中升高或者降低)。

03

寻找靶关系

寻找目的miRNA可能与哪些蛋白存在相互作用,或者目的蛋白可能是哪些miRNA的靶蛋白。

04

 确认靶关系

确认在体内这种靶关系确实存在,miRNA会降低靶蛋白的表达量。

05

确认生物功能

证明miRNA-靶蛋白这种相互作用关系会导致什么样的生物学功能。


miRNA研究的主要流程及部分工具

报告基因在miRNA功能验证中的应用已经是经典且常规的手段,主要用于验证 miRNA 和 mRNA 之间的靶向关系。2024诺奖获得者Victor Ambros的文章Immunopurification of Ago1 miRNPs selects for a distinct class of microRNA targets中也用到了此类验证实验,涉及克隆载体和双报告基因检测试剂。

Promega作为最资深的萤光素酶技术供应商,可提供完整的miRNA报告基因功能验证解决方案,包括:


miRNA靶标克隆载体

pmirGLO Dual-Luciferase 

miRNA Target Expression Vector


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载体

推荐指数

为miRNA靶标研究而设计的载体,可通过将 miRNA 的靶序列插入到主报告基因萤火虫萤光素酶基因(luc2)的下游或者 3'端而实现

报告基因检测试剂

Dual-Luciferase® Reporter Assay System

Dual-Glo® Luciferase Assay System

推荐指数

全球第一个商品化的双报告基因检测试剂Dual-Luciferase® Reporter Assay System具有出众的产品性能和质量稳定性;Dual-Glo® Luciferase Assay System可实现辉光检测,信号半衰期更长,适合高通量检测。


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底物试剂

miRNA转染

FuGENE® SI Transfection Reagent


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转染试剂

推荐指数


FuGENE® SI 是一种创新型、100% 合成、多组分转染试剂,用于递送 siRNA、miRNA 和其他小 RNA 分子。是高效、温和的小RNA递送试剂。可高效转染具有挑战性的和常规的真核细胞系。



miRNA研究工具推荐列表

应用

产品

miRNA

提取

ReliaPrep™ miRNA Cell and Tissue Miniprep System

Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit

Maxwell® RSC miRNA Plasma and Serum Kit

miRNA

分析

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Oligo(dT)

ImProm-II™ Reverse Transcription System

M-MLV Reverse Transcriptase

GoTaq® qPCR Master Mix

RNasin® Ribonuclease Inhibitors

miRNA

功能验证

pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector

Dual-Luciferase® Reporter Assay System

Dual-Glo® Luciferase Assay System

FuGENE® SI Transfection Reagent

miRNA

功能筛选

CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay

LDH-Glo™ Cytotoxicity Assay

Caspase-Glo® 3/7 Assay


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文献列表


1. WTAP promotes osteosarcoma tumorigenesis by repressing HMBOX1 expression in an m6A-dependent manner. Cell Death Dis 11, 659 (2020). https://doi.org/10.1038/s41419-020-02847-6

应用产品:


2. Knockdown of microRNA‑143‑5p by STTM technology affects eumelanin and pheomelanin production in melanocytes. Mol Med Rep 20: 2649-2656, 2019. https://doi.org/10.3892/mmr.2019.10492

应用产品:

  • pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector

  • Dual-Luciferase® Reporter Assay System


3. MiR-29b-3p promotes particulate matter-induced inflammatory responses by regulating the C1QTNF6/AMPK pathway. Aging (Albany NY). 2020 Jan 18;12(2):1141-1158. 

doi: 10.18632/aging.102672.  PMID: 31955152

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4. Evaluation of five column-based isolation kits and their ability to extract miRNA from human milk. Journal of cellular and molecular medicine, (2021).25(16), 7973–7979. https://doi.org/10.1111/jcmm.16726

应用产品:


5. Comparison and optimisation of microRNA extraction from the plasma of healthy pregnant women. Molecular medicine reports, (2021).23(4), 1. https://doi.org/10.3892/mmr.2021.11897

应用产品:


6. A MicroRNA Next-Generation-Sequencing Discovery Assay (miND) for Genome-Scale Analysis and Absolute Quantitation of Circulating MicroRNA Biomarkers. International journal of molecular sciences, (2022). 23(3), 1226. https://doi.org/10.3390/ijms23031226

应用产品:


7. MicroRNAs as potential therapeutics to enhance chemosensitivity in advanced prostate cancer. Scientific reports,(2018). 8(1), 7820. 

https://doi.org/10.1038/s41598-018-26050-y

应用产品:


8. MicroRNA Expression Analysis of In Vitro Dedifferentiated Human Pancreatic Islet Cells Reveals the Activation of the Pluripotency-Related MicroRNA Cluster miR-302s. International journal of molecular sciences, (2018). 19(4), 1170. https://doi.org/10.3390/ijms19041170

应用产品:


9. Reducing Hepatocyte Injury and Necrosis in Response to Paracetamol Using Noncoding RNAs. Stem cells translational medicine,  (2016). 5(6), 764–772.

https://doi.org/10.5966/sctm.2015-0117
应用产品:


10. Genome-Wide Posttranscriptional Dysregulation by MicroRNAs in Human Asthma as Revealed by Frac-seq. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950),  (2018). 201(1), 251–263. 

https://doi.org/10.4049/jimmunol.1701798

应用产品:


11. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine, (2017). 96(34), e7917. https://doi.org/10.1097/MD.0000000000007917

应用产品:


12. Efficient antisense inhibition reveals microRNA-155 to restrain a late-myeloid inflammatory programme in primary human phagocytes. RNA biology, (2021). 18(5), 604–618. https://doi.org/10.1080/15476286.2021.1885209

应用产品:


13. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14. Cell,(1993). 75(5), 843–854. 

https://doi.org/10.1016/0092-8674(93)90529-y

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我们的技术专家随时解答您的问题。如需要更多的实验或产品相关问题,请拨打下方电话与我们联系。

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Promega Corporation是一家为生命科学行业提供高质量解决方案和技术支持的全球领先生物技术企业。在其44年的历史中,Promega已建立了包含有4000多种支持细胞和分子生物学的目录产品和定制产品的组合。如今,Promega开发的萤光素酶(即荧光素酶)等技术推动了活细胞分析、药物发现、分子诊断和人体识别等领域的创新,并且由实验室科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医学、制药、临床诊断以及农业和环境检测。Promega总部位于美国威斯康星州麦迪逊市,在16个国家设有分公司,拥有50多家全球经销商。如需获取更多信息,请访问www.promega.com





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