人参皂苷Rg3及其与索拉非尼、奥沙利铂联合诱导裸鼠人肝癌移植瘤细胞调亡的实验研究

采用上海复旦大学肝癌研究所构建的裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20为观察对象，将60只己造模的裸鼠随机分成A、B、C、D、E、F、G、H共8组，A、C、D、H组各7只，B、E、F、G组各8只，分笼饲养。A组：人参皂苷Rg3组；B组：奥沙利铂组；C组：索拉非尼组；D组：人参皂苷Rg3+索拉非尼组；E组：人参皂苷Rg3+奥沙利铂组；F组：奥沙利铂+索拉非尼组；G组：人参皂苷Rg3+奥沙利铂+索拉非尼组；H组：生理盐水对照组。

肿瘤接种后第11天开始给药，药物用量用法分别为：人参皂苷Rg3 5mg/kg，qd，2w；奥沙利铂 5mg/kg，q2d，2w；索拉非尼 30mg/kg，qd，2w；其中人参皂苷Rg3、奥沙利铂为腹腔注射，索拉非尼为灌胃。

治疗期间每3天称重并观察裸鼠的一般情况。治疗2周后处死裸鼠，剥离瘤体称重，计算抑瘤率，并采用多种实验方法观察药物对移植瘤细胞的影响：

(1)倒置显微镜观察细胞形态学变化；

(2)原位末端标记法(TUNEL)检测各组移植瘤细胞凋亡率；

(3)免疫组化法观察各组对裸鼠肝移植瘤表达Survivin、Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白的影响；

(4)免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测Survivin、Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白的表达情况。

与生理盐水对照组相比，人参皂苷Rg3单药组的抑瘤率为20.6%(P>0.05)，其余各治疗组与对照组相比均有统计学意义(P<0.05)；人参皂苷Rg3分别与索拉非尼、奥沙利拍两两联合后较人参皂苷Rg3单药组抑瘤作用明显增强(P<0.05)。根据Weeb系数计算方法，人参皂苷Rg3与索拉非尼或奥沙利钼联合用药表现为协同作用；索拉非尼与奥沙利铂联合用药表现为相加作用；三药联合表现为协同作用。

显微镜下观察各组移植瘤细胞形态显示：与生理盐水组相比，各组移植瘤细胞均有较明显的凋亡形态改变，其中三药的细胞凋亡形态更为显著；

原位末端标记(TUNEL)法检测计算结果表明：与生理盐水组相比，各组对移植瘤细胞均有明显诱导细胞凋亡的作用，以三药诱导凋亡效果更强(P<0.01)。两药联合组优于各单药组(P<0.01)；三药联合组优于各单药组及两药组(P<0.01、P<0.05)。

免疫组化结果显示：各用药组Bcl-2蛋白的表达显著降低，与生理盐水对照组相比，有非常显著性差异(P<0.01)；所有两药联合组Survivin的蛋臼表达与生理盐水组相比有显著差异(P<0.05)；除两药联合组D、E组外，其余各组Caspase-3、Bax的表达与生理盐水组比较差异不明显(P>0.05)。

免疫蛋白印迹法(Western bloting)实验结果显示：相比生理盐水组，各组Caspase-3及Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05)，Survivin及Bcl-2蛋白表达可见明显降低(P<0.05)。

人参皂苷Rg3在抑制肝癌生长上具有一定疗效，但单药的作用较弱，与索拉非尼、奥沙利铂联合治疗时，在协同增效的同时改善了化疗药物及分子靶向药物所具有的毒副作用，改善了生活质量。人参皂苷Rg3诱导肝癌细胞凋亡的机制可能是通过上调凋亡相关基因Caspase-3、Bax表达，下调Survivin、Bcl-2表达，以及上调Bax/Bcl-2比值而实现的，但其具体机制仍有待进一步深入研究。