RNA干扰 V.S 基因编辑

RNA干扰（RNAi）是一种转录后基因调控，即通过小干扰RNA诱导同源RNA降解, RNAi对同源基因的序列特异性沉默可以是由小干扰RNA（siRNA）、短发夹RNA（shRNA）触发, 由于基因靶向的高特异性，使得RNAi成为一种合适的工具来进行基因的功能性评估，不过同样存在“脱靶”情况，如siRNA进入miRNA通路下调非预期靶基因表达或激活天然免疫系统等。

CRISPR-Cas9介导基因组编辑是由sgRNA引导，Cas9蛋白可以实现对目的基因的定向切割，使DNA产生双链断裂(DSB)，经过细胞自主性的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)进行修复，实现对靶基因进行敲除、插入和突变修饰。与siRNA和shRNA类似，CRISPR系统靶向基因的特异性由与sgRNA的序列互补性决定。

两者作用机制和异同点比较如下:

shRNA质粒或者重组病毒即通过shRNA在细胞核内进行基因转录后，通过Dicer处理并产生功能性siRNA，和通过化学合成的siRNA直接转染进入细胞质中功能一样, Dicer将在RNA结合蛋白TRBP的帮助下将双链siRNA加载到Argonaute（AGO2）蛋白，形成复合体（RNA-induced silencing complex，RISC），然后，siRNA将解开双链，其反义链与靶mRNA结合后，AGO2将特异性降解靶mRNA，从而抑制其翻译。

CRISPR-Cas9介导的基因编辑需要包括：crRNA, tracrRNA 和Cas9。

其中crRNA和tracrRNA可以通过化学合成一段式sgRNA或者构建质粒载体提供；Cas9可以通过纯化蛋白或者构建Cas9表达载体表达，crRNA-tracrRNA/gRNA分子可以和Cas9蛋白一并转染，也可以通过质粒一起转染。crRNA和tracrRNA被装载到Cas9中以形成RNP复合物，可以靶向到与其互补的DNA的PAM序列附近， Cas9通过RuvC和HNH结构域切割双链DNA产生双链断裂（DSB），细胞可以自主精确修复（不会导致遗传变化）或不完全修复以在靶基因中产生突变，插入、缺失等多种突变都可能存在，这样形成的突变可能对蛋白质功能没有影响，也可能会导致蛋白无法正常表达及功能缺失。图中所示突变将诱导mRNA编码区的移码（由红色X表示）。

RNAi and CRISPR-Cas9差异比较：

原理就介绍到这里啦，下面来看下吉玛基因提供的丰富的产品设计，看看都有哪款能够为您所用呢？

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1. RNAi技术由于操作简便，使用广泛，但CRISPR/Cas9可使基因功能丧失更彻底，由于需要进行单克隆分选鉴定，工作量较大，成本较高。

2. 一些情况下，例如需要改变无法转录的DNA区域或者无法实现基因的有效干扰，可以考虑基因敲除。

3. 某些特殊情况，敲除该基因会导致细胞生长缓慢，停滞甚至死亡，这样获得基因敲除细胞株比较困难，因此就需要选择通过RNA干扰的手段实现功能减弱。

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