2022年1月，宾大Jonathan A Epstein教授联合CAR-T细胞治疗先驱Carl June、诺奖得主Drew Weissman在《Science》发表重磅封面文章“CAR T cells produced in vivo to treat cardiac injury”，引发了业内广泛关注。随后，他们创立的Capstan Therapeutics（“Capstan”）走向公众视野，并在2022年至2024年，完成了近3亿美元融资。

11月16日，Capstan在2024年美国风湿病学会（ACR）会议上展示了其基于抗体偶联LNP的mRNA 体内CAR-T候选药物CPTX2309的最新临床前数据：通过新型靶向CD8的脂质纳米颗粒（tLNPs）递送编码CD20 CAR的mRNA，在非人灵长类动物（NHP）中实现了B细胞重建：外周和组织中B细胞深度耗竭以及以初始B细胞为主的B细胞回升。

在人源化小鼠模型中，外周、脾脏和骨髓可实现CD8+ T细胞约60%的CAR-T重编程效率，在淋巴结中为30%左右，外周血的B细胞约在3h完全清除。CPTX2309可在动物模型中将CD8+ T细胞原位重编程为CD19 CAR-T细胞，产生显著的药效。

CPTX2309可在多个健康成人PBMC的体外实验中高效产生功能性CAR-T细胞和B细胞的完全清除。进一步比较了多种自身免疫性疾病包括抗合成酶综合征（Antisynthetase syndrome）、皮肌炎（Dermatomyositis）、免疫介导的坏死性肌病（Immune-mediated necrotizing myopathy）、多发性硬化（Multiple sclerosis）、类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis）、硬皮病（Scleroderma）、干燥综合征（Sjogren’s syndrome）、系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus）共计33例患者来源的PBMC中，对这些患者的B细胞进行了CD19的表达丰度，以及CD8⁺ T细胞上CD8表达丰度的检测，进一步体外实验显示CPTX2309处理后的PBMC，CD8⁺ CAR-T的重编程效率超过60%，B细胞清除率达到70%以上。

Capstan评估了CPTX2309的一种交叉反应性抗CD20 CAR替代物（CPTX2309-S）在非人灵长类动物（NHP）中的安全性和有效性。在剂量为0.1-2.0 mpk，给药3次的情况下，0.1-1.0mpk给药组显示出良好的安全性和耐受性，其中1.5和2.0mpk组观察到了部分指标的显著升高（IL-6, MCP-1）。CPTX2309-S给药后，在NHP外周血中检测到CAR-T细胞的迅速生成。

令人欣喜的是，在每三天给药一次的情况下，第二次和第三次给药后的CAR-T细胞生成比例均高于第一次，这可能来源于第一次给药后绝大部分B细胞的被清除之后，后续两次给药CAR-T的生存时间延长所致。且从体内CAR-T生成的比例来看，0.5mpk即已经到达顶峰，继续提高给药量至2.0mpk，未观察到CAR-T生成比例的进一步升高。这也与后续组织清除实验中观察到的0.5mpk与1.0mpk均能达到相似的清除深度结果基本一致。在非人灵长类动物血液和组织中实现B细胞的快速清除，以及初始B细胞进行回升，从而实现了B细胞重建。

在1mpk时，可实现脾脏7-20天的持续清零，第41天时B细胞恢复至正常水平，且大部分为naïve B细胞；给药量在0.5mpk及以上时，Day 14均可观察到脾脏为B细胞清零状态。

在减少给药次数至2次的情况下，给药量在1mpk及以上时，也可实现组织中B细胞的深度清除。

在本次会议上，Capstan并未公开其tLNP相关的表征数据、生产制造方面的数据。而业内普遍认为CMC是制约抗体偶联LNP进入临床的一个核心考量点。目前仅有虹信生物公开了其工程化细胞靶向递送平台（EnC-LNP）的关键表征数据，已经能够实现工程化细胞靶向LNP的可控、可重复以及放大制备，并能实现偶联前后LNP粒径大小无明显变化。

基于靶向递送In vivo CAR-T细胞疗法主要分为两大类型：

代表公司有Interius、Umoja和Kelonia、济因生物等。Umoja在研CD19靶向原位生成CAR-T细胞疗法UB-VV111的IND申请获得美国FDA批准，用于治疗血液恶性肿瘤。Interius BioTherapeutics宣布其in vivo CAR疗法候选药物INT2104已获得人类研究伦理委员会（HREC）的批准和澳大利亚治疗商品管理局（TGA）的临床试验通知（CTN）许可，正式开启了治疗B细胞恶性肿瘤的首次人体临床试验。济因生物于2024年10月全球首次报道了在研体内靶向慢病毒的In vivo CAR-T治疗的复发难治B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）和B 细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)并获得完全缓解（CR）。

代表公司有Capstan、Generation Bio、虹信生物、星锐医药等。目前全球尚没有管线进入IND申报阶段。2023年3月，Generation Bio基于ctLNP细胞靶向性递送系统与Moderna 达成合作，共同开发多个非病毒载体类核酸药物。

当前，In vivo CAR-T正式进入全球视野，将进入临床爆发阶段，已实现多起BD交易。如2024年1月，艾伯维（AbbVie）和Umoja Biopharma宣布达成总额超14亿美元的体内CAR-T肿瘤药物开发协议。2024年2月，安斯泰来与Kelonia达成体内CAR-T疗法的开发协议，总协议金额近8亿美元。而在In vivo CAR-T这一新兴领域中，我们也看到了国内公司并跑甚至是领跑的迹象，相对于双抗、ADC类以组合式创新为特征的早期研发获得全球认可，这一趋势也更值得大家拭目以待。

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多款in vivo CAR疗法进入/即将进入临床：

基于抗体偶联LNP的In vivo CAR-T疗法，由于mRNA的瞬时表达特性，主流公司都在探索其在以B细胞过度增殖产生过多自身抗体为特征的自身免疫性疾病中的应用。而在这一领域，目前出现了一个强劲的对手是T细胞衔接器（TCE）类双抗，仅在2024年就公开了多达7起出海交易。

已有的TCE治疗自身免疫性疾病的临床数据中，CD19xCD3双抗Blinatumomab成功应用于系统性硬化（1例）及风湿性关节炎（6例）的治疗，在风湿性关节炎的治疗病例中，治疗3个月后，患者仍需要服用免疫抑制剂阿巴西普维持症状，患者RF抗体水平6个月后回升，推测是由于B细胞清除不彻底导致(Eur J Cancer. 2024 Jun;204:114071; Nat Med. 2024 Jun;30(6):1593-1601)。

BCMAxCD3双抗Teclistamab治疗了5例自身免疫性疾病，其中SLE患者治疗5次后，仍需继续服用羟氯喹，且4/5患者出现感染副作用，包括上呼吸道感染、肺炎、鼻窦炎以及抗水痘带状疱疹病毒、病毒性胃肠炎、皮肤感染等，推测与BCMA阳性的长效浆细胞清除导致患者的免疫力下降所致(N Engl J Med. 2024 Sep 5;391(9):864-866; N Engl J Med. 2024 Sep 5;391(9):867-869)。

全球公开CAR-T治疗自身免疫疾病临床数据超过77 例，绝大部分获得无药物缓解。自体CAR-T治疗SLE的先驱Kyverna近期在其2024年的研发进展中阐述了CAR-T与单抗、双抗在作用时间、清除时长、临床获益与成本等诸多因素上的差异化优势：CAR-T单次给药后完全清除（100%）B细胞，患者可达到完全无药物缓解状态，因此认为CAR-T在清除深度上优于TCE。而双抗经2轮给药（需住院治疗），后续仍需要服用免疫抑制剂维持治疗(https://www.sec.gov/)。

本次Capstan公开NHP数据，在外周甚至是组织中B细胞清除深度达到了与自体CAR-T疗法类似的水平，因此Capstan未来的临床数据值得期待。而In vivo CAR-T相对于自体CAR-T有着显著的可及性优势，因此在自身免疫性疾病的临床探索上，In vivo CAR-T将成为TCE类药物的有力竞争者。

而无论是In vivo CAR-T，还是TCE，相信两种药物均有最适合的自身免疫性疾病适应症，而不是一种药物完全战胜另一种药物。也只有等到In vivo CAR-T与TCE的临床数据，才能完全证明各自的优劣势。期待Capstan的CPTX2309早日进入临床试验，不管哪种药物能拔得头筹，获益者都是饱受疾病折磨的广大病患。