人参皂苷Rg3对荷卵巢癌的严重联合免疫缺陷鼠的抗肿瘤血管生成作用的研究

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分组：

取卵巢癌细胞株SKOV3细胞制成磷酸盐缓冲液(PBS)悬液，调节浓度为2×10⁷个/ml。每只SCID鼠腹腔内注射SKOV3细胞PBS悬液0.5ml，建立荷卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型。将荷瘤鼠随机分为3组，每组3只。(1)空白组：SICD鼠荷瘤后不进行干预；(2)对照组：荷瘤鼠每天予PBS液0.4ml灌胃；(3)实验组：荷瘤鼠每天予人参皂苷Rg3和PBS混悬液0.4ml灌胃，人参皂苷Rg3浓度为0.75mg/ml。实验组和对照组均在荷瘤24h后开始灌胃，每天1次，连续26d。

检测指标：

分别采用逆转录聚合酶链反应技术、酶联免疫吸附法、免疫组织化学法检测3组荷瘤SCID鼠的血管内皮生长因子(VEGF)mRNA、蛋白及微血管密度(MVD)。

统计学方法：

各组数据进行方差齐性检验，方差齐者采用单样本t检验。所有数据采用S SPS10.0软件进行处理。

生存情况：

28d后，3组小鼠均未见死亡；出现不同程度的行动迟缓，反应迟钝，腹部膨隆，消瘦等，但实验组较对照组和空白组症状明显减轻，仍保持对外界刺激较好的反应，动作灵敏，腹部平坦，体重呈上升趋势，为0.5~1.0g/周。

组织学特征：

实验组肿瘤细胞形态与对照组和空白组相似，表现为核大深染，核质比例大，多见核分裂，核内可见数个核仁；癌巢中出现嗜伊红的坏死区，并有少量肿瘤细胞碎片及炎性细胞浸润。见图1。

图1  HE×200

卵巢癌组织中VEGFmRNA表达量的测定：

3组荷瘤鼠肿瘤组织中均检测到VEGFmRNA的表达，其相对水平分别为：空白组254±4，对照组273±44，实验组119±16，见图2。实验组VEGFmRNA的表达量显著低于空白组和对照组(P均<0.01)。

图2 肿瘤组织中VEGF mRNA的电泳结果

血浆中VEGF蛋白的测定：

3组荷瘤鼠血浆中均能测到游离形式VEGF蛋白，空白组为(18.5±2.1)pg/ml，对照组为(20.5±1.7)pg/ml，实验组为(14.6±0.7)pg/ml。其中，实验组明显低于空白组(P=0.023)和对照组(P=0.004)。

卵巢癌组织中MVD的测定：

经CD34免疫组织化学染色后，见组织切片中血管内皮细胞呈棕染，簇状分布在肿块边缘，见图3。3组荷瘤鼠肿瘤组织MVD值分别为：空白组(65±12)个/mm3，对照组(73±10)个/mm³，实验组(43±7)个/mm³，实验组明显低于空白组(P=0.033)和对照组(P=0.010)。

图3 CD34免疫组织化学染色标记血管内皮细胞。SP×200

人参皂苷Rg3在荷卵巢癌SCID鼠中的抗肿瘤作用可能与其下调VEGF的表达和抑制肿瘤血管生成有关，抑制肿瘤血管生成作用部分是通过下调VEGF表达实现的。