揭秘2024诺贝尔奖：这颗RNA“明星”如何颠覆基因世界

Victor Ambros和Gary Ruvkun于1993年首次发现miRNA，这一发现标志着基因调控研究的巨大突破。他们在研究秀丽隐杆线虫（C. elegans）时，发现了一种全新的小RNA分子——miRNA，它通过与特定的mRNA结合，调控基因表达。这一发现颠覆了当时对基因调控的认知，并为后续的研究提供了重要线索。

Ambros通过研究lin-4基因，发现该基因并不编码蛋白质，而是生成了一种小RNA分子，这种小RNA分子通过与lin-14基因的mRNA结合，抑制其翻译。Ruvkun则进一步研究了这一过程，发现lin-4小RNA与lin-14 mRNA具有互补序列，通过这种结合，阻止了lin-14蛋白的生成。两人的发现揭示了miRNA作为基因表达调控的重要角色，从而为他们赢得了2024年诺贝尔生理学或医学奖。

miRNA是长约20-25个核苷酸的小RNA分子，由基因转录形成初级miRNA（pri-miRNA），其在核内由Drosha酶切割成前体miRNA（pre-miRNA），并在细胞质中由Dicer酶进一步切割生成成熟miRNA双链。一条链被加载到RNA诱导的沉默复合体（RISC）中，另一条降解。RISC是miRNA发挥调控功能的关键，它是miRNA功能的关键平台。miRNA被加载到RISC中后，与mRNA发生互补配对。结合的结果取决于互补的程度：如果是完全互补，RISC中的核酸酶会直接切割mRNA；如果是部分互补，RISC会抑制翻译，阻止蛋白质的合成。RISC复合体的多功能性使miRNA在基因调控中发挥了重要作用。

miRNA模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitors）是研究miRNA功能的常用工具。miRNA mimics是合成的RNA分子，模拟内源性miRNA的功能，用于增强特定miRNA的活性；而miRNA inhibitors则通过与内源性miRNA结合，抑制其功能，常用于功能丧失实验。配合这些工具，可以特异性地使细胞中的目标miRNA的表达水平及其靶基因的表达水平发生变化，从而对其具体功能进行探索和验证。

丹纳赫生命科学旗下IDT的miRNA inhibitors是一种高效的单链反义寡核苷酸，用于阻断特定miRNA的功能。通过精准结合miRNA，抑制其与mRNA的互作，适用于miRNA功能研究。其经过2'-O-甲基和ZEN^™修饰，提供高稳定性和特异性，助力miRNA相关功能性研究。

而验证的手段需要对miRNA及其靶基因的RNA水平进行匹配分析，利用qPCR和NGS技术是检测miRNA表达的核心手段。qPCR通过特异性引物设计，能够定量检测特定miRNA的表达水平，常用于精准miRNA研究。而NGS则可进行高通量测序，全面分析样本中的miRNA组及转录组，适合大规模研究，尤其是在复杂疾病中的miRNA表达研究。结合这些技术，研究者能够深入了解miRNA的功能和作用机制。

丹纳赫生命科学旗下IDT 的PrimeTime Custom qPCR Probe Assays助力miRNA的表达分析。采用荧光标记探针技术，提供高灵敏度和特异性，确保在各种实验条件下实现精准的基因定量分析。用户可根据实验需求定制引物和探针序列，适用于基因表达检测和生物标志物研究。

此外，IDT的xGen^™ RNA文库制备试剂盒是一款高效、灵活的工具，用于RNA测序文库的构建，适用于多种样本类型的转录组分析。该试剂盒通过优化的酶学反应和文库构建流程，确保从少量起始RNA中生成高质量的测序文库。

外泌体是细胞分泌的纳米级囊泡，直径约30-150纳米，参与细胞间通讯。它们携带蛋白质、脂质、RNA等生物分子，调控基因表达，在肿瘤、免疫调节和神经系统疾病中具有重要作用。近年来外泌体研究逐渐受到关注，而其中携带的miRNA在细胞通讯中扮演了重要角色，尤其是在肿瘤微环境中。

外泌体的分离方法主要有超速离心法、柱提法和化学沉淀法等。分离出外泌体后，还可以通过纳米流式细胞术等技术对外泌体的属性进行进一步的分析。

丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特生命科学的Optima^™ XE 系列超速离心机是一款高性能、精准控制的实验室工具，专为生物样本的超速离心需求设计。该系列离心机具有出色的转速控制和广泛的应用范围，适用于DNA/RNA提取、蛋白分离、病毒颗粒纯化及外泌体分离等高要求实验。Optima^™ XE 系列采用先进的用户界面和节能技术，提供高效、稳定的运行体验，帮助科研人员在生物学和医学研究中获得可靠、可重复的实验结果。

丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特生命科学的CytoFLEX Nano 纳米流式细胞分析仪是一款高灵敏度的流式细胞仪，专为分析和表征小颗粒，如外泌体、病毒和纳米颗粒而设计。该仪器采用多激光、多色荧光检测技术，具备出色的分辨率和灵敏度，能够精确检测30纳米级别的小颗粒。CytoFLEX Nano的操作简便、灵活，可广泛应用于细胞外囊泡研究、纳米医学、基因治疗及免疫学领域，为科研人员提供可靠的纳米颗粒分析解决方案。

外泌体中所携带的miRNA通过调控基因表达参与多种生物过程。例如miR-21-5p和**miR-155-5p，它们与免疫细胞的分泌密切相关，参与免疫调节。癌症干细胞（CSCs）释放的外泌体中含有miR-19b-3p、miR-1246、miR-424-5p和miR-628-5p等miRNA。这些miRNA通过外泌体传递调控与肿瘤发生相关的生物过程。在低氧条件下相关的miRNA，如miR-193a-3p、miR-210-3p等，其参与低氧应激反应，帮助细胞适应缺氧环境。

miRNA在癌症中的表达异常，为其作为肿瘤生物标志物提供了可能性。现代技术的进步，使得miRNA的非侵入性检测成为现实，通过分析外周血中的miRNA水平变化，研究者可以检测出早期癌症的信号。

我们可以参考2023年的早期胰腺癌分子诊断专家共识，通过检测外周血、肿瘤组织中差异表达miRNA（如miR-30c-5p、miR-24-3p、miR-23a-3p等），能够实现灵敏度高的早期诊断。与单一miRNA相比，多个miRNA组合的检测能显著提高诊断的特异性和准确性。共识中提到与传统的病理诊断作对比，可以看到利用miRNA组合进行分子诊断，表现出97.17%的阳性符合率和95.4%的阴性符合率，证据质量很高。