卡培他滨联合人参皂苷Rg3对小鼠乳腺癌的抗血管生成作用

分组及处理：

细胞植入后，将小鼠随机分为5组（每组20只），每周监测肿瘤生长情况。

第一组小鼠(MTD卡培他滨组)：接受3周周期的常规MTD计划：每天500mg/kg卡培他滨，连续2周，然后休息1周。

第二组小鼠（低剂量卡培他滨组）：给予卡培他滨200mg/kg/d，连续灌胃给药。

第三组小鼠（人参皂苷Rg3组）：灌胃给予人参皂苷Rg3 10mg/kg/d。

第四组（联合组）：每日灌胃卡培他滨200mg/kg和人参皂苷Rg3 10mg/kg3。

第五组（对照组）：小鼠作为对照组，用无菌生理盐水处理。

观察指标

每周通过尾静脉采血，记录外周血白细胞(WBC)计数。监测小鼠的体重、皮毛外观和运动能力；记录各组动物的生存数据；免疫组化验查血管内皮生长因子（VEGF）表达及微血管密度(MVD)。

统计分析：

肿瘤体积、白细胞、MVD值的结果通过方差分析进行统计学分析，然后采用Student-Newman-Keuls试验。VEGF表达数据采用卡方检验和费舍尔精确检验进行评估。生存资料采用Kaplan-Meier生存分析。所有的统计分析均使用SPSS12.0软件包进行。P<0.05为有统计学意义。

肿瘤生长评估

当持续给予低剂量卡培他滨时，与MTD组相比，肿瘤生长延迟(P<0.05)。低剂量卡培他滨与人参皂苷Rg3联合使用导致肿瘤生长延迟，比单独使用更显著和持久（即超过5周）(P<0.05)（图1）。

毒性评价

在接受MTD卡培他滨治疗的小鼠中，白细胞计数减少。与对照组相比，连续低剂量卡培他滨、人参皂苷Rg3组和联合组的白细胞计数没有任何显著下降。接受传统MTD方案治疗的小鼠似乎不愿意移动，皮肤松弛而无光泽；超过85%的小鼠体重减轻了10%。在连续低剂量卡培他滨、人参皂苷Rg3和联合组中，超过90%的小鼠没有明显的体重减轻；它们对外界刺激反应迅速，皮肤总是光滑整洁。

生存分析

对照组小鼠的中位生存时间为36天。常规方案能够将中位总生存期提高到42天(P>0.05)。与常规MTD方案相比，接受持续低剂量卡培他滨治疗的小鼠的中位总生存期为45天，无显著差异(P>0.05)。连续低剂量卡培他滨联合人参皂苷Rg3治疗的小鼠与单独使用时的小鼠几乎相同（P>0.05）。

组织病理学分析

血管生成指标的比较显示，不同治疗组之间存在一定的差异。对照组小鼠的肿瘤显示出的微血管计数最高，而MTD卡培他滨小鼠的肿瘤的微血管计数相对较低(P<0.05)。低剂量化疗或单独使用人参皂苷Rg3的微血管计数低于MTD卡培他滨(P<0.05)。然而，在接受低剂量化疗联合人参皂苷Rg3治疗的小鼠获得的肿瘤中，测量到最低的计数(P<0.05)。血管形态分析显示，联合治疗的肿瘤为毛细血管小，缺乏对照组或常规化疗小鼠肿瘤中所见的大毛细血管扩张血管或肾小球样结构。与MTD组相比，连续低剂量卡培他滨组的VEGF表达量较低(P<0.05)。当将人参皂苷Rg3加入持续低剂量卡培他滨治疗时，其指标明显降低(P<0.05)（表1）。

我们的结果表明，人参皂苷Rg3降低了小鼠乳腺肿瘤内的微血管密度和VEGF的表达：低剂量卡培他滨与人参皂苷Rg3联合使用后，微血管密度和VEGF的表达进一步降低，从而增强了抗血管生成的效果。我们的研究证明了卡培他滨和人参皂苷Rg3在节律化疗方案中应用的可行性，这被证明是安全、有效的，并有可能适用于临床治疗。