近日，邦耀生物与华东师范大学、上海长征医院合作的新一代异体通用型CAR-T疗法（TyU19）治疗自身免疫疾病（自免）研究成果在Cell上发表“Allogeneic CD19-targeted CAR-T therapy in patients with severe myositis and systemic sclerosis”，这是国际上首次报道异体通用型CAR-T在治疗自身免疫疾病中获得成功，这也证明了通用型CAR-T（Universal CAR-T, UCAR-T）在自免领域的显著潜力和优势。
文章披露了TyU19在临床试验中成功治疗了3例难治性自免病患者，包括1名免疫介导的坏死性肌炎（IMNM）和2名系统性硬化症（SSc）。这些患者在接受TyU19细胞治疗后，未出现任何发热以及细胞因子风暴的症状，且患者的总改善评分（TIS）迅速从基线的72.5上升至100，并在随访期间持续保持这一水平。影像及病理结果也显示，患者肌肉炎症已得到了显著缓解[1]。
目前全球已上市多款自体CAR-T细胞产品用于血液瘤的治疗，除了肿瘤外，也已经有多款自体细胞治疗产品入局自免适应症，例如药明巨诺的瑞基奥仑塞，治疗中重度难治性系统性红斑狼疮已进入Ⅱ期临床。而在UCAR-T管线中，布局自免的除了国内的邦耀生物，国外的Atara Biotherapeutics公司的CD19 UCAR-T 产品ATA3219以及Sana Biotechnology公司的CD19 UCAR-T 产品SC291均已进入临床阶段。
对比自体CAR-T细胞，UCAR-T拥有成本低、现货供应、可大量生产等优点。但是同时UCAR-T也存在着技术壁垒高、工艺复杂、安全性挑战大等缺点，所以，在实际生产工艺中UCAR-T仍面临着诸多难题。
健新原力拥有多个技术创新平台以及成熟的质量研究经验，能够提供高效、快速、低成本和安全的UCAR-T细胞工艺解决方案，支持临床和商业化需求。以下将展开UCAR-T疗法的关键工艺和质量研究的特点，并通过案例进行分享。
健新原力基于病毒转导、InnoEPore™非病毒转导和InnoEditor™基因编辑三大技术平台，开发了成熟的UCAR-T细胞制备平台。
关键工艺
利用自主包装纯化的高质量慢病毒载体进行CAR转导和转导参数优化； 利用电转平台进行多基因敲除和参数优化；
利用磁珠分选去除CD3+细胞；
评估 UCAR-T细胞的IFN-γ因子释放水平。
我们利用初步优化的慢病毒转导参数 (如MOI、转染密度等)进行T细胞转导。D3至D13期间，CAR+细胞比例能够持续稳定在50%-60%之间（图1），同时D13的载体拷贝数检测结果为低于5拷贝/细胞。
图1. T细胞慢病毒转导后CD19 CAR的表达
我们利用初步优化的基因敲除参数(如电转参数、RNP用量等) 进行T细胞双基因的同时敲除，D5至D13期间CD3-B2M-细胞比例的流式检测结果能够持续稳定在85%以上。
图2. T细胞TCR、BM2双基因敲除
将培养后收获的细胞经过CD3磁珠负选，CD3-细胞比例从分选前的94.44%提高至分选后的99.98%，CD3-B2M-细胞比例从分选前的88.4%提高至分选后的94.0%（图3）。
图3. CD3+ T细胞通过负选去除后CD3流式检测数据
UCAR-T细胞和K562-CD19靶细胞进行共孵育24h后检测IFN-γ因子释放水平的数据。数据显示，在效靶比1:1的条件下，IFN-γ的检测值能够达到13000 pg/ml水平以上（图4）。
图4. UCAR-T细胞和K562-CD19靶细胞进行共孵育后IFN-γ的释放
为确保UCAR-T细胞产品的质量和安全性，提高UCAR-T治疗的成功率和可应用性，我们需要对UCAR-T进行质量研究。
考虑要点
需要确保选用的细胞质量符合标准，高品质的细胞可以提高制作UCAR-T细胞的成功率和成本效益。需要确保细胞来源可靠，细胞品质符合要求，并对细胞生产过程进行严格监测和控制。
2. 电转工艺的规范化
制定通用型的工艺流程和标准，并对电转的各个环节进行质量控制。例如，制作UCAR-T细胞时需要严格控制电转的操作步骤和条件，避免误差和质量问题的出现。
3. 质量控制的建立
UCAR-T的研究需要建立适当的质量控制机制，对UCAR-T细胞的获得、培养、评估等多个环节进行质量控制，确保每一步的质量符合要求，降低不良率。
4. 安全性评估
对UCAR-T细胞的安全性进行评估和监测，以确保UCAR-T细胞在治疗中的安全性和有效性。例如，在UCAR-T的电转工艺质量研究中，如果能够有效地解决安全性问题，将有助于提高UCAR-T治疗的成功率和可应用性。
5. 其他考虑要点
不同于针对特定癌症的自体CAR-T，UCAR-T的研究需要更多考虑治疗的通用性和可重复性
健新原力InnoEPore™非病毒电转平台，能够提供高效、快速、低成本和安全的基因工程化T细胞工艺解决方案，支持细胞治疗领域临床和商业化需求，用高效、合规和成熟的工艺经验推进各类电转工艺的细胞治疗管线的转化。
Why InnoEPore™ ?
大规模流式连续电转平台单次转染细胞数最高可达1×1010 细胞，可以实现平稳放大，大幅降低成本。 在保证较高细胞活率和回收率的前提下， T细胞CAR的表达可达90%，且制备周期短。
利用封闭化管路耗材，最大程度降低电转流程的细胞污染风险；管路耗材安装和操作简单，具有较好的批间重复性。
关键的设备和耗材均来自国产，大幅降低生产成本且供货稳定。
Reference
1. Wang X, Wu X, Tan B et.al Allogeneic CD19-targeted CAR-T therapy in patients with severe myositis and systemic sclerosis. Cell. 2024 Jul 9:S0092-8674(24)00701-3. doi: 10.1016/j.cell.2024.06.027. Epub ahead of print. PMID: 39013470.
2. Huang Y, Hu KJ, Hu YX, Huang H. [Universal chimeric antigen receptor T cells therapy: current status and future perspectives]. Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2021 Sep 14;42(9):782-786. Chinese. doi: 10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2021.09.015. PMID: 34753238; PMCID: PMC8607041.
3. Moretti A, Ponzo M, Nicolette CA, Tcherepanova IY, Biondi A, Magnani CF. The Past, Present, and Future of Non-Viral CAR T Cells. Front Immunol. 2022 Jun 9;13:867013. doi: 10.3389/fimmu.2022.867013. PMID: 35757746; PMCID: PMC9218214.
4. Kim TK, Eberwine JH. Mammalian cell transfection: the present and the future. Anal Bioanal Chem. 2010 Aug;397(8):3173-8. doi: 10.1007/s00216-010-3821-6. Epub 2010 Jun 13. PMID: 20549496; PMCID: PMC2911531.
5. Lambricht L, Lopes A, Kos S, Sersa G, Préat V, Vandermeulen G. Clinical potential of electroporation for gene therapy and DNA vaccine delivery. Expert Opin Drug Deliv. 2016;13(2):295-310. doi: 10.1517/17425247.2016.1121990. Epub 2015 Dec 19. Erratum in: Expert Opin Drug Deliv. 2016;13(5):769. PMID: 26578324.
6. Sun W, Jiang Z, Jiang W, Yang R. Universal chimeric antigen receptor T cell therapy - The future of cell therapy: A review providing clinical evidence. Cancer Treat Res Commun. 2022;33:100638. doi: 10.1016/j.ctarc.2022.100638. Epub 2022 Sep 22. PMID: 36184307.
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