包含非强制性建议

盐酸多柔比星生物等效性试验指导意见草案

本指导意见草案，如果最终定稿，代表的是美国食品和药品监督管理局（FDA）目前对该品种的思考。它并未建立或赋予任何个人任何权利，并非强制要求FDA或公众。可讨论本文建议以外的其他方法，只要所用的方法满足适用的法规要求。如果讨论本文建议以外的其他方法，请与FDA仿制药办公室的相关人员联系。

活性成分：	盐酸多柔比星
剂型/用药途径：	脂质体注射剂/静脉注射
推荐的研究方案：	2个

当受试制剂和参比制剂均为聚乙二醇化的脂质体产品时

?应具有相同的组分

?由具有硫酸铵梯度的主动地脂质体装载工艺制成

?具有相同的脂质体特性，包括脂质体组成、药物包封状态、脂质体内部环境、脂质体粒径分布、片层数目、脂质体表面嫁接PEG、表面电位或电荷、体外泄漏率等。

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下面的临床和体外研究被推荐用以证明生物等效性：

体内生物等效性研究

1．研究类型：空腹*

试验设计：单次给药、双向交叉体内试验

规格：50mg/瓶或20mg/瓶

用量：50mg/m²

受试者：卵巢癌患者其疾病已经进一步发展或以铂类为基础的化疗后复发，已经接受或计划开始以RLD或RS进行治疗。

附注：

?多柔比星是一种细胞毒性药物。因此，进行多柔比星脂质体注射液的生物等效性研究需进行生物药新药临床研究申请以确保受试者的安全。

?交叉研究的两组将在病人接受常规治疗的两天进行，这样治疗方案不会改变或延迟。

?除了研究期间患者随机的使用受试制剂或参比制剂进行治疗外，其他时间患者的护理治疗方案不应改变。

?剂量为每4周一次，应连续使用两个疗程。

?任何同时服用的药物在研究的两个阶段都必须完全相同。

?由于担心心脏毒性，在开始前就应该将心脏状态记录在案。

?在研究过程中，任何患者的体重改变导致给药剂量改变达到±5%者，必须停止该患者的研究，并且排除在分析之外。

排除标准：

?经过4个疗程的治疗后，多柔比星的暴露会导致550mg/m²或更多的总存在期暴露量。

?协议的排除标准中必须排除肝功能明显受损的患者。

?对盐酸多柔比星的常规配方或RLD或RS的组分有过敏史的患者，禁止选为受试者。

?女性受试者不应怀孕或哺乳。

?患者的年龄小于18岁或大于75周岁。

?如果是处于骨髓毒性药物治疗的情况下，被分枝杆菌、巨细胞病毒、弓形虫、卡氏肺孢子虫或其他微生物感染的几率非常大时。

?临床上值得注意的心脏、肝脏或肾脏疾病。

*如果病人的健康状况不予许禁食，主办者可以在需要进行的研究期间提供非高脂肪饮食，或者，可以在标准（非高脂肪）早餐2小时后开始治疗。

待测分析物（在适当的生物体液中）：游离的多柔比星和脂质体包封的多柔比星

生物等效性评价依据（90% CI）：游离的多柔比星和脂质体包封的多柔比星的AUC和Cmax。

注：关键的生物等效性研究应使用由拟议的商业规模生产过程产生的测试产品进行。

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体外研究

2．研究类型：脂质体的粒径分布

试验设计：受试制剂和参比制剂均至少采用3批进行体外生物等效性研究。

待测参数：D₁₀, D₅₀, D₉₀

生物等效性评价依据（95% 置信上限）：D₅₀和跨度[（即D₉₀-D₁₀）/ D₅₀ ]或多分散性指数可以用群体生物等效性方法分析。

溶出度试验方法和采样次数：

在FDA推荐溶出方法的网站上可以查询到公开的该品种的溶出度信息（

附加信息：

药物产品组成相同

作为注射药物产品，除缓冲液、防腐剂和抗氧化剂的差异外，仿制的盐酸多柔比星脂质体注射液必须与RLD或RS在定性和定量方面完全相同，申请人应确认和描述这些差异，并证明这些差异不影响药物产品的安全性和有效性。目前，对于需要证明缓冲液、防腐剂和抗氧化剂的不同不会对药物产品的安全性和有效性产生影响的研究，FDA还没有给出建议。

脂质辅料是脂质体制剂的关键。ANDA发起者获得的脂类应与RLD或RS中发现的脂类采用相同的合成路线类别（天然的或合成的）。按脂质体药物产品原则草案的要求¹，提供的有关脂类成分的化学、制造和控制的信息应与药物物质所需信息的详细程度相同。对于脂类辅料，ANDA发起者应有相应的技术参数，这些技术参数应与用于RLD和RS中的脂类辅料的技术参数相同。应提供脂类辅料的额外比较特征（超出规范），包括分子种类的分布。

硫酸铵梯度的主动脂质体装载工艺

为了满足成分相同和其他等效性试验，期望ANDA发起者采用硫酸铵梯度主动装载工艺，主要步骤包括：1）含硫酸铵的脂质体的形成，2）脂质体尺寸的减少，3）硫酸铵梯度的产生，4）活性药物的装载。主动装载过程采用脂质体内部和外部环境的硫酸铵浓度梯度驱使多柔比星扩散到脂质体内部^2,3。

发起者应采用质量源于设计的方法识别关键物料属性和关键工艺参数，指导工艺优化。建议通过评估脂质体特性对工艺参数和属性变化的敏感性来确定关键工艺参数和关键物料属性。关键工艺参数最佳值的选择应基于与RLD或RS的脂质体特性的比较结果。

1 Draft guidance for industry: Liposome drug products chemistry, manufacturing, and controls; human pharmacokinetics and bioavailability; and labeling documentation, FDA (2002), http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/ucm070570.pdf

2 A. Gabizon, H. Sheemda, Y. Barenholz. Pharmacokinetics of pegylated liposome doxorubicin: review of animal and human studies. Clin Pharmcokinet 42(5): 419-436 (2003)

3 F. Martin.Product evolution and influence of formulation on pharmaceutical properties and pharmacology, Advisory Committee for Pharmaceutical Science Presentation (Jul 2001), http://www.fda.gov/ohrms/dockets/AC/01/slides/3763s2_08_martin.ppt.

等效的脂质体特性

与其他局部作用的复杂产品生物等效性要求（如鼻腔喷雾和吸入产品）相同，脂质体体外特性研究应至少需要ANDA的三批次产品以及RLD或RS进行（至少有一批ANDA的产品由商业规模生产，用于体内生物等效性研究）。宣称与RLD或RS等效的ANDA的特性中至少应包括的属性有：

?脂质体组成：脂质体组成包括以下成分并需要进行测定：脂质含量、游离和包封药物、内外硫酸盐和铵浓度、组氨酸浓度和蔗糖浓度。药物脂质比和药物包封率可由脂质体组成值计算。

?封装的药物状态：RLD或RS中的多柔比星主要以多柔比星硫酸盐的形式沉淀在脂质体内。仿制的盐酸多柔比星脂质体在脂质体内必须有等量的多柔比星沉淀。

?内环境（体积、pH、硫酸根和铵离子浓度）：脂质体的内部环境，包括其体积、pH值、硫酸盐和铵浓度，维持了多柔比星的沉淀。脂质体组成部分所描述的成分（包括硫酸盐离子）的总含量和游离浓度的测量允许推断脂质体内部的浓度。

?脂质体的形态和层数：由药物装载，药物保留，和药物从脂质体的释放率确定的脂质体的形态和层可能会受到成层程度的影响。

?脂质双分子层相变：脂质双分子层相变的等效性将有助于证明双层流动性和均匀性的等价性。原辅料的脂质和脂质体的相变曲线应与RLD或RS可比较。

?脂质体粒径分布：脂质体粒径分布是保证等效被动靶向的关键。ANDA发起者应选择最合适的粒度分析方法来确定试验产品和参比产品的粒度分布。每个试验和参比产品所需研究的脂质体产品瓶数不应少于30个（即，三个批次中每批不少于10个）。关于推荐的统计等效性测试的详细信息，请参见上述推荐研究2。

?脂质体表面连接PEG：表面结合甲氧基聚乙二醇（MPEG）聚合物涂层的脂质体避免了被单核吞噬细胞系统（MPS）清除，增加了在血液中循环的时间。已知的PEG层厚度在热力学上是有限的，并且估计为几个纳米量级。应确定PEG层厚度。

?表面电位或电荷：脂质体表面电荷可影响清除、组织分布和细胞摄取。应测量脂质体表面电荷。

多种条件下的体外泄漏：应研究体外药物泄漏测试来表征脂质双层和包裹的多柔比星的物理状态，以弥补在一系列的生理条件下对不可控泄漏的控制缺失，并确保至肿瘤细胞的等效药物传递。下面是一些建议条件的例子。

体外药物泄漏条件	目的	理论基础
在37?C、50%人血浆中24小时	血液循环中脂质体稳定性的评价	血浆主要模拟血液情况
在37?C，pH值5.5、6.5和7.5缓冲液中24个小时	在正常组织、癌细胞周围或癌细胞内模拟药物释放	正常组织：ph值7.3 癌组织：pH值6.6 癌细胞内部（内涵体和溶酶体）：pH 5-6（内涵体和溶酶体可能参与肿瘤细胞摄取脂质体和诱导药物释放）
在一定温度范围内（43?C，47?C，52?C，57?C）在pH 6.5的缓冲液中长达12小时，或直至完全释放	评价脂质双层的完整性	脂质的相变温度（TM）由刚性、刚度和化学组成等脂质双层性质决定。释放的差异作为温度的函数（低于或高于TM）将反映脂质特性的微小差异。
37?C低频（20 kHz）超声2小时或直至完全释放	脂质体中包封药物状态的评价	低频超声（20 kHz）通过短暂引入孔状缺陷破坏脂质双分子层，并通过脂质体内的凝胶溶解来控制多柔比星的释放

游离和包封药物体内血浆药代动力学的等效性

由于多柔比星是一种细胞毒性药物，因此在用于人体的多柔比星脂质体注射液开展生物等效性研究时需进行生物药新药临床研究申请。建议对卵巢癌患者进行以50mg/m²的剂量，单次给药、空腹、双向交叉生物等效性研究。发起者应对游离的和脂质体包封的多柔比星都进行测定，以证实仿制的脂质体制剂和RLD或RS具有相同的体内稳定性。这项研究可根据病人的需要在空腹或标准饮食条件下进行。关于推荐的统计等效性测试的详细信息，请参见上述推荐研究1。

Doxorubicinhydrochloride(盐酸多柔比星)生物等效性指导原则草案

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