生物等效性试验分析方法学评价应考虑的几个方面

审评三部李士敏魏农农赵明

【摘要】本文主要从准确度、精密度、灵敏度方法、专属性、线性范围、样本的稳定性、方法相关性等方面提出了对生物等效性试验分析方法学评价的一些认识。

已有国家标准口服制剂的研发和申请注册在目前的申报品种中占据的数量庞大，该类药物一般需要与已上市同类品种进行生物等效性比较试验，作为评价该药物与已上市品种具有同等内在质量的一个考量指标。体内药物分析方法学的评价对判断其生物等效性试验结果的可信性是至关重要的，现就生物等效性试验中的分析方法学评价谈一点我们的意见。
体内药物分析方法学的评价应主要对以下指标进行考察：
（一）、准确度：评价测定结果与真值的符合程度，用回收率表示。回收率可分为绝对回收率和相对回收率。对不同的实验目的，采用不同的回收率评价指标。
绝对回收率（又称提取回收率）考察测定结果与“真值”的接近程度，从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以纯标准品产生的响应值即为分析物的绝对回收率。应选用高、中、低三种浓度分别进行考察，绝对回收率一般要求在50%~80%。
相对回收率（又称方法回收率），从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以加入到生物基质中已知量的标准品产生的响应值即为分析物的相对回收率。该评价指标已扣除了目标药物在样品的前处理过程损失而造成的系统误差。高、中浓度点测得的相对回收率应在85~115%，低浓度（定量限）应在80~120%。
在血药浓度监测、生物利用度研究、药代动力学参数的确定以及药物的分布等方面的研究，更关注的是绝对回收率，而在进行生物等效性研究时更关注的是相对回收率指标。
（二）、精密度：同一均匀样品多次测定结果之间的接近程度。精密度可分为以下几种表述方式。不同的表述方式具有不同的含义。
日内（批内）精密度：在同一天、同一批样品或用同一批试剂、同一条标准曲线测得的精密度，考察的是方法的重复性。
日间（批间）精密度：分析方法在不同时间测定结果的精密度，考察样品测定时仪器的性能、试剂、标准曲线、环境条件等发生微小变化而导致测定结果的变异。
中间精密度：考察随机变动因素对精密度的影响，如不同的操作人员、不同的仪器等对精密度的影响程度。
复现性：不同实验室之间的方法精密度。
一般要求精密度（RSD）应小于15％，在LOQ 附近的RSD 应小于20％。
（三）、灵敏度：可检出药物的最小量。灵敏度可用以下方式表述：
检测限（LOD）：LOD=3N/S或以空白背景响应值的3倍作为估计值
定量限（LOQ）：S/N=10或以空白背景响应值的10倍作为估计值。定量限应是标准曲线的下限，应能满足测定灵敏度的要求，其准确度应在80%~120%，RSD小于20%（n=5）。
最低检测浓度：LOQ/进样体积
上述表达的灵敏度均为仪器的灵敏度，实测样品的灵敏度还与样品的取样量与前处理有关。
（四）、方法专属性（选择性）：是考察样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确、专一地测定分析物的能力。
1、代谢产物的干扰：可通过多次给药后的生物样本进行考察。
2、内源性物质的干扰：可通过对生物样品的净化处理方法来排除。
3、其他药物的干扰：改用具有分离能力或专属性强的分析方法。
如采用色谱法时，空白试验是最常用的方法，至少应采用6个不同个体的空白试验样本进行考察，并提供相应的色谱图，以证实方法的专属性。
（五）、线性范围：指一种分析方法的精密度、准确度都符合要求的试验结果，而且供试物浓度成线性的变化范围，一般用标准曲线来描述（注意配制的介质）。线性范围要求覆盖实测浓度，包括LOQ，上限为最高浓度的120%，下限为最低浓度的80%。（至少6个浓度点）；相关系数γ不低于0.99，同时符合准确度和精度度要求（偏差小于15%，最低点的偏差小于20%）。评价时还应注意标准曲线的截距与钭率的关系：截距过大，可能是有干扰成分或者是线性范围设置过宽。
（六）、样本的稳定性：
1、短期室温稳定性：要求高、低浓度样本在4~24 h内稳定。考察温度、光照、空气、酶解等因素。
2、长期低温条件下的稳定性：从第一个样本采集至最后一个样本的分析为一个考察时间周期，贮存温度一般为-20℃ ，如果需要也可在-70℃贮存。要求高、低浓度至少分别测定3次，测得结果与第一天测得的相应浓度比较应保持稳定。
3、冻融试验：取高、低浓度各3份于-20℃贮存24小时，取出后在室温自然解冻，取样测定，然后再将样品放回冷冻12~24小时，如此重复循环二次以上，分别比较各次测定结果。
4、对照液和内标液的稳定性：室温考察6小时稳定性，然后冷藏7~14天或恰当的周期后进行测定，与新配溶液的测定结果进行比较。
（七）、方法相关性：对同一种样品，用已证明有相当专属性的分析方法与新建立的分析方法同时进行测定，比较两种分析方法测得结果的相关程度。通常用相关系数γ 表示，一般要求两种方法的相关系数γ 在0.95以上。
以上是我们对生物等效性试验分析方法学评价方面的一些认识，希望对进行此方面工作的人员有所帮助。

生物等效性试验分析方法学评价应考虑的几个方面

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